Expressão de e-caderina e claudina-3 no epitélio cólico após terapia com infliximabe: modelo experimental de colite de exclusão / Expression of e-cadherin and claudin-3 in the colonic epithelium after the infliximab therapy: experimental model of disuse colitis

RESUMO - RACIONAL: A etiopatogenia da colite por desuso (DC) ainda não foi totalmente elucidada. As principais teorias consideram que a doença pode estar relacionada ao aumento de bactérias anaeróbias, falta de suprimento de ácidos graxos de cadeia curta (AGCC) e distúrbios imunológicos que se desenvolvem em segmentos colorretais desprovidos de trânsito fecal. OBJETIVO: Verificar se a aplicação de infliximabe modifica o conteúdo tecidual das proteínas E-caderina e claudina-3 no epitélio cólico de ratos sem trânsito intestinal. MÉTODOS: Vinte dois ratos foram submetidos a derivação do trânsito intestinal pelo procedimento de Hartmann. Eles permaneceram com o ostoma por 12 semanas para permitir o desenvolvimento da colite de exclusão. Em seguida, foram divididos em três grupos experimentais: seis animais receberam 2,0 ml de solução salina/semana, oito infliximabe na dose de 5 mg/Kg/semana e, os demais, infliximabe na dose de 10 mg/Kg/semana por 5 semanas consecutivas. Em seguida, os animais foram eutanasiados e os segmentos cólicos com e sem trânsito intestinal foram removidos. A colite por desuso foi diagnosticada pelas alterações histológicas definidas por uma escala previamente validada. Expressão tecidual de E-caderina e claudina-3 foi avaliada por imuno-histoquímica, e o conteúdo tecidual de ambas as proteínas foi quantificado por análise de imagem assistida por computador. RESULTADOS: Segmentos cólicos exclusos de trânsito fecal apresentaram maior grau de inflamação do que os expostos ao trânsito fecal. Inflamação foi menor nos animais tratados com infliximabe, independente da dose utilizada. Níveis de E-caderina e claudina-3 estavam reduzidos no cólon excluso. O tratamento com infliximabe aumentou os níveis das proteínas em segmentos do cólon sem trânsito intestinal, principalmente nos animais que receberam a dose de 10mg/kg/semana. CONCLUSÃO: Infliximabe reduz inflamação nos segmentos do cólon excluso e aumenta o conteúdo tecidual de E-caderina e claudina-3, especialmente na concentração de 10mg/kg/semana.

ABSTRACT - BACKGROUND: The etiopathogenesis of disuse colitis (DC) has not yet been fully elucidated. The main theories consider that the disease may be related to an increase in anaerobic bacteria, the lack of short-chain fatty acid (SCFA) supply, and immunological disorders that develop in the colorectal segments devoid of fecal transit. AIM: The aim of this study was to verify whether the application of infliximab modifies the tissue content of E-cadherin and claudin-3 proteins in colonic epithelium of rats devoid of intestinal transit. METHODS: A total of 22 rats underwent intestinal transit bypass using Hartmann's procedure. They remained with the shunt for 12 weeks to allow the development of DC. Later, they were divided into three experimental groups: six animals received 2.0 mL saline solution/week, eight received infliximab at a dose of 5 mg/kg/week, and eight received infliximab at a dose of 10 mg/kg/week for 5 consecutive weeks. At the end of this period, the animals were euthanized, and the colonic segments with and without intestinal transit were removed. DC was diagnosed based on the histological changes defined by a previously validated scale. The tissue expression of E-cadherin and claudin-3 was assessed by immunohistochemistry, and the tissue content of both proteins was quantified by computer-aided image analysis. RESULTS: The colonic segments excluded from fecal transit showed a higher degree of inflammation than those exposed to fecal transit. The degree of inflammation was lower in animals treated with infliximab, regardless of the dose used. The levels of E-cadherin and claudin-3 were reduced in the excluded colon. Treating animals with infliximab increased the levels of both proteins in the colonic segments without intestinal transit, especially in animals receiving a dose of 10 mg/kg/week. CONCLUSION: Infliximab therapy reduces inflammation in the colonic segments excluded from intestinal transit and increases the tissue content of E-cadherin and claudin-3 proteins, especially when used at a concentration of 10 mg/kg/week.

Study of morphometric and ruminal parameters in santa inês sheep fed spineless cactus (Opuntia ficus-indica, MILL) / [Estudo dos parâmetros morfométricos e ruminais em ovinos Santa Inês alimentados com cactus sem espinhos (Opuntia ficus-indica, MILL)]

The present study aimed to morphometrically evaluate the ruminal mucosa and ruminal fluid characteristics of Santa Inês sheep fed different levels of spineless cactus as a replacement for Tifton grass hay. A total of 32 intact male Santa Inês sheep, approximately 180 days old and with a mean weight of 32.0±1.6kg, were studied in a completely randomized design with four treatments and eight replicates. The morphometric measurements evaluated in the ruminal epithelium (papilla height and surface area) were significantly affected (P< 0.05) by supplementation of the diet with spineless cactus, and these effects showed increasing linear trends. Evaluations of the ruminal fluid also showed a significant increasing linear effect (P< 0.05) for ammonia and a quadratic effect for microbial protein. The inclusion of spineless cactus in the sheep diet affects the ruminal epithelium morphology, including the papilla height and surface area, and favors the absorption process in the rumen. The diet containing higher levels of spineless cactus led to maximum microbial protein production. These results characterize spineless cactus as a feasible alternative for feeding sheep during periods of drought, when the typical food source is scarce.(AU)

O presente estudo teve como objetivo avaliar morfometricamente a mucosa ruminal e as características do líquido ruminal de ovinos Santa Inês alimentados com diferentes níveis de palma forrageira como substituta do feno de capim-Tifton. Um total de 32 ovinos, machos inteiros, da raça Santa Inês, com aproximadamente 180 dias de idade e peso médio de 32,0±1,6kg, foi estudado em delineamento inteiramente ao acaso, com quatro tratamentos e oito repetições. As medidas morfométricas avaliadas no epitélio ruminal (altura e área superficial da papila) foram significativamente afetadas (P<0,05) pela suplementação da dieta com palma forrageira, e esses efeitos mostraram tendências lineares crescentes. As avaliações do fluido ruminal também mostraram um efeito linear crescente significativo (P<0,05) para a amônia e um efeito quadrático para a proteína microbiana. A inclusão de palma forrageira na dieta de ovinos afeta a morfologia do epitélio ruminal, englobando a altura e a área da papila, e favorece o processo de absorção no rúmen. A dieta contendo níveis mais altos de palma forrageira levou à produção máxima de proteína microbiana. Esses resultados caracterizam a palma forrageira como uma alternativa viável para a alimentação de ovelhas durante períodos de seca, quando a fonte típica de alimento é escassa.(AU)

Inocuidade micotoxicológica e viabilidade de Aspergillus spp com potencial probiótico provenientes do trato digestório bovino / Mycotoxicological safety and viability of Aspergillus spp with probiotic potential from the bovine digestive tract]

Objetivou-se, com a presente pesquisa, avaliar a viabilidade de Aspergillus spp. com potencial probiótico durante o armazenamento e diante da pressão da microbiota autóctone, bem como a tolerância aos principais ácidos graxos da fermentação ruminal. Verificou-se também a inocuidade micotoxicológica desses isolados fúngicos cultivados em meio de cultivo sólido. Foram avaliados 20 isolados de Aspergillus spp., provenientes do trato gastrointestinal de bovinos criados em Urochloa decumbens lignificada. Esses fungos foram identificados por análise de sequências do DNAr e foram selecionados por apresentarem expressivo potencial celulolítico. O método vapor de amônia foi utilizado para detecção de cepas produtoras de micotoxinas. Os isolados foram avaliados quanto à viabilidade de crescimento em fluido ruminal por até 96 horas e estocagem em condições ambientais. Observou-se que os fungos avaliados não produziram aflatoxinas e que 95% dos isolados apresentaram resistência aos ácidos ruminais. Dois isolados, selecionados a partir das análises anteriores, apresentaram viabilidade sob a pressão da microbiota autóctone e de metabólitos do ecossistema ruminal e permanecem viáveis por, no mínimo, dois anos. Conclui-se que os isolados do gênero Aspergillus selecionados nesta pesquisa apresentam características fisiológicas para serem utilizados com aditivos microbianos ou probióticos para o ambiente ruminal.(AU)

The aims in this study were to evaluate the viability of Aspergillus spp. with probiotic potential during storage, pressure of autochthonous microbiota and tolerance to the main fatty acids of ruminal fermentation. The mycotoxicological safety was also verified. Twenty isolates from the gastrointestinal tract of cattle raised in lignified Urochloa decumbens were identified by rDNA sequence analysis and were previously selected because they showed significant cellulolytic potential. The ammonia vapor method was used to detect the production of mycotoxins. The isolates were evaluated for viability of ruminal fluid growth for up to 96 hours and storage under environmental conditions. The evaluated fungi did not produce aflatoxins, and 95% of them had resistance to ruminal acids. Two isolates, selected according these tests, presented viability on autochthonous microbiota pressure and metabolites from the ruminal ecosystem and remain viable for at least two years. In this research, the selected Aspergillus spp. isolates present physiological characteristics to be used with microbial additives or probiotic.(AU)

Evaluation of enemas containing sucralfate in tissue content of muc-2 protein in experimental model of diversion colitis / Avaliação de enemas com sucralfato no conteúdo tecidual da proteina muc-2 em colite de exclusão experimental

ABSTRACT Background: The effects of topical application of sucralfate (SCF) on the tissue content of MUC-2 protein have not yet been evaluated in experimental models of diversion colitis. Aim: To measure the tissue content of MUC-2 protein in the colonic mucosa diverted from fecal stream submitted to the SCF intervention. Methods: Thirty-six rats underwent derivation of intestinal transit through proximal colostomy and distal mucous fistula. The animals were divided into three groups which were submitted application of enemas with saline, SCF 1 g/kg/day and SCF 2 g/kg/day. Each group was divided into two subgroups, according to euthanasia was done after two or four weeks. The colitis diagnosis was established by histopathological study and the inflammatory intensity was evaluated by previously validated scale. The MUC-2 protein was identified by immunohistochemistry and the tissue content was measured computerized morphometry). Results: The application of enemas with SCF in the concentration of 2 g/kg/day reduced inflammatory score of the segments that were diverted from fecal stream. The content of MUC-2 in diverted colon of the animals submitted to the intervention with SCF, independently of intervention period and the used concentration, was significantly greater than animals submitted to the application of enemas containing saline (p< 0.01). The content of MUC-2 after the intervention with SCF in the concentration of 2 g/kg/day was significantly higher when compared to the animals submitted to the application containing SCF at concentration of 1.0 g/kg/day (p<0.01). The tissue content of MUC-2 reached the highest values after intervention with SCF in the concentration of 2 g/kg/day for four weeks (p<0.01). Conclusion: The preventive application of enemas containing SCF reduces the inflammatory score and avoids the reduction of tissue content of MUC-2, suggesting that the substance is a valid therapeutic strategy to preserve the mucus layer that covers the intestinal epithelium.

RESUMO Racional: Os efeitos da aplicação tópica de sucralfato (SCF) no conteúdo tecidual da proteína mucina-2 (MUC-2) ainda não foram avaliados em modelos experimentais de colite de exclusão. Objetivo: Mensurar o conteúdo tecidual da proteína MUC-2 na mucosa cólica sem trânsito intestinal submetida à intervenção com SCF. Método: Trinta e seis ratos foram submetidos à derivação intestinal por colostomia proximal terminal e fístula mucosa distal. Foram divididos em três grupos segundo recebessem clisteres contendo solução fisiológica (SF), SCF 1 g/kg/dia e SCF 2 g/kg/dia. Cada grupo foi dividido em dois subgrupos, segundo a eutanásia ser realizada após duas ou quatro semanas. O diagnóstico de colite foi estabelecido por estudo histopatológico e a intensidade inflamatória foi avaliada por escala validada. A expressão tecidual da MUC-2 foi identificada por imunoistoquímica e seu conteúdo mensurado por morfometria computadorizada. Resultados: A aplicação de clisteres com SCF na concentração de 2 g/kg/dia reduziu a intensidade inflamatória no cólon sem trânsito fecal. O conteúdo tecidual de MUC-2 no cólon sem trânsito dos animais submetidos à intervenção com SCF, independente do tempo de intervenção e da concentração utilizada, foi maior quando comparado aos animais tratados com SF (p<0,01). O conteúdo de MUC-2 após a intervenção com SCF na concentração de 2 g/kg/dia foi maior quando comparado aos animais submetidos à intervenção com concentração menor (p<0,01). O conteúdo de MUC-2 foi maior após intervenção com SCF na concentração de 2 g/kg/dia por quatro semanas (p<0,01). Conclusão: A aplicação preventiva de clisteres com SCF reduz o grau de inflamação e preserva o conteúdo tecidual de MUC-2, em segmentos desprovidos de trânsito intestinal, mostrando-se uma estratégia terapêutica válida para preservar a camada de muco que recobre o epitélio intestinal.

[retracted article]: evaluation of enemas containing sucralfate in tissue content of muc-2 protein in experimental model of diversion colitis / [artigo retratado]: avaliação de enemas com sucralfato no conteúdo tecidual da proteina muc-2 em colite de exclusão experimental

ABSTRACT Background: The effects of topical application of sucralfate (SCF) on the tissue content of MUC-2 protein have not yet been evaluated in experimental models of diversion colitis. Aim: To measure the tissue content of MUC-2 protein in the colonic mucosa diverted from fecal stream submitted to the SCF intervention. Methods: Thirty-six rats underwent derivation of intestinal transit through proximal colostomy and distal mucous fistula. The animals were divided into three groups which were submitted application of enemas with saline, SCF 1 g/kg/day and SCF 2 g/kg/day. Each group was divided into two subgroups, according to euthanasia was done after two or four weeks. The colitis diagnosis was established by histopathological study and the inflammatory intensity was evaluated by previously validated scale. The MUC-2 protein was identified by immunohistochemistry and the tissue content was measured computerized morphometry). Results: The application of enemas with SCF in the concentration of 2 g/kg/day reduced inflammatory score of the segments that were diverted from fecal stream. The content of MUC-2 in diverted colon of the animals submitted to the intervention with SCF, independently of intervention period and the used concentration, was significantly greater than animals submitted to the application of enemas containing saline (p< 0.01). The content of MUC-2 after the intervention with SCF in the concentration of 2 g/kg/day was significantly higher when compared to the animals submitted to the application containing SCF at concentration of 1.0 g/kg/day (p<0.01). The tissue content of MUC-2 reached the highest values after intervention with SCF in the concentration of 2 g/kg/day for four weeks (p<0.01). Conclusion: The preventive application of enemas containing SCF reduces the inflammatory score and avoids the reduction of tissue content of MUC-2, suggesting that the substance is a valid therapeutic strategy to preserve the mucus layer that covers the intestinal epithelium.

RESUMO Racional: Os efeitos da aplicação tópica de sucralfato (SCF) no conteúdo tecidual da proteína mucina-2 (MUC-2) ainda não foram avaliados em modelos experimentais de colite de exclusão. Objetivo: Mensurar o conteúdo tecidual da proteína MUC-2 na mucosa cólica sem trânsito intestinal submetida à intervenção com SCF. Método: Trinta e seis ratos foram submetidos à derivação intestinal por colostomia proximal terminal e fístula mucosa distal. Foram divididos em três grupos segundo recebessem clisteres contendo solução fisiológica (SF), SCF 1 g/kg/dia e SCF 2 g/kg/dia. Cada grupo foi dividido em dois subgrupos, segundo a eutanásia ser realizada após duas ou quatro semanas. O diagnóstico de colite foi estabelecido por estudo histopatológico e a intensidade inflamatória foi avaliada por escala validada. A expressão tecidual da MUC-2 foi identificada por imunoistoquímica e seu conteúdo mensurado por morfometria computadorizada. Resultados: A aplicação de clisteres com SCF na concentração de 2 g/kg/dia reduziu a intensidade inflamatória no cólon sem trânsito fecal. O conteúdo tecidual de MUC-2 no cólon sem trânsito dos animais submetidos à intervenção com SCF, independente do tempo de intervenção e da concentração utilizada, foi maior quando comparado aos animais tratados com SF (p<0,01). O conteúdo de MUC-2 após a intervenção com SCF na concentração de 2 g/kg/dia foi maior quando comparado aos animais submetidos à intervenção com concentração menor (p<0,01). O conteúdo de MUC-2 foi maior após intervenção com SCF na concentração de 2 g/kg/dia por quatro semanas (p<0,01). Conclusão: A aplicação preventiva de clisteres com SCF reduz o grau de inflamação e preserva o conteúdo tecidual de MUC-2, em segmentos desprovidos de trânsito intestinal, mostrando-se uma estratégia terapêutica válida para preservar a camada de muco que recobre o epitélio intestinal.

Rumen fermentation and digestibility of spent mushroom ( Pleurotus ostreatus ) substrate inoculated with Lactobacillus brevis for Hanwoo steers / Fermentación ruminal y digestibilidad de la cama de champiñón (Pleurotus ostreatus) desechada inoculada con Lactobacillus brevis en novillos Hanwoo / Fermentação ruminal e digestibilidade de resíduo de substrato de cogumelo (Pleurotus ostreatus) inoculado com Lactobacillus brevis en novilhos Hanwoo

Abstract Background: Ensiling spent mushroom substrate (SMS) generally increases its nutrient digestibility and quality. Objective: To determine the feed quality and digestibility of SMS from Pleurotus ostreatus (SMSP) inoculated with lactic acid bacteria (LAB: Lactobacillus brevis) in Hanwoo steers. Methods: Ruminal disappearance of SMSP and inoculated SMSP (ISMSP) were evaluated in three rumen-fistulated Hanwoo steers (408 ± 13.0 Kg body weight). Further, three healthy Hanwoo steers (336 ± 69.0 Kg body weight) were randomly allotted to one of three dietary treatments (control: 25% straw, 75% concentrates; treatments: 25% straw, 60% concentrates, and 15% of either SMSP or ISMSP) in a 3×3 Latin square design. Results: The chemical composition of the ISMSP diet did not differ from that of the control or the SMSP diets. In the ISMSP diet, the rate of decrease of pH of ruminal fluid and the increase in storage period was greater than with the SMSP diet. Ruminal disappearance of dry matter, crude protein, neutral detergent fiber, and acid detergent fiber were slightly higher in steers fed ISMSP than those fed SMSP. Furthermore, the degradation rate and effective degradability of crude protein was greater in the ISMSP diet than in the SMSP diet. Effective ruminal fermentation characteristics and total nutrients digestibility were not affected by SMSP nor ISMSP diet. Conclusion: The SMSP and ISMSP diets could replace formulated concentrate without adverse effects and be a cost-effective feed for Hanwoo steers. Furthermore, LAB inoculation improved the SMSP preservation.

Resumen Antecedentes: El ensilado de cama de champiñón desechada (SMS) generalmente aumenta la digestibilidad y la calidad de sus nutrientes. Objetivo: Determinar la calidad del alimento y digestibilidad del SMS a partir de Pleurotus ostreatus (SMSP) inoculado con bacterias ácido-lácticas (LAB: Lactobacillus brevis) en bueyes Hanwoo. Métodos: La desaparición ruminal del SMSP y ISMSP (SMSP inoculado) fue evaluada en tres bueyes Hanwoo fistulados en el rumen (408 ± 13,0 Kg peso corporal). Igualmente, tres bueyes Hanwoo sanos (336 ± 69,0 Kg peso corporal) fueron asignados al azar a uno de los tres tratamientos dietéticos (control: 25% de heno, 75% de concentrados; tratamientos: 25% de heno, 60% de concentrados y 15% de SMSPo ISMSP) en un diseño cuadrado latino 3×3. Resultados: La composición química de la dieta ISMSP no difirió de la del control o de la dieta SMSP. En la dieta ISMSP, la tasa de disminución del pH del fluido ruminal y el incremento del tiempo de almacenamiento fueron mayores que los de la dieta SMSP. La desaparición ruminal de la materia seca, proteína cruda, fibra detergente neutra y la fibra detergente ácida fue ligeramente superior en los bueyes alimentados con el ISMSPque en aquellos alimentados con SMSP. Además, la tasa de degradación y la degradabilidad efectiva de la proteína cruda fueron mayores en la dieta ISMSPque en la dieta SMSP. Las características de la fermentación ruminal efectiva y la digestibilidad total de nutrientes no fueron afectadas por la dieta SMSP ni por la de ISMSP. Conclusión: Las dietas SMSPe ISMSP podrían reemplazar el concentrado formulado sin efectos adversos y ser una alimentación económica para los bueyes Hanwoo. Además, la inoculación con LAB mejoró la conservación del SMSP.

Resumo Antecedentes: Ensilagem de resíduo de substrato de cogumelo (SMS) geralmente aumenta a digestibilidade e a qualidade dos nutrientes. Objetivo: Determinar a qualidade da alimentação e digestibilidade do RSC apartir do Pleurotus ostreatus (SMSP) inoculado com bactérias de ácido láctico (LAB: Lactobacillus brevis) nos novilhos Hanwoo. Métodos: Desaparecimento ruminal do SMSP e ISMSP (SMSP inoculado) foram avaliados em três novilhos Hanwoo fistulados no rúmen (408 ± 13.0 Kg peso corporal). Além disso, três novilhos Hanwoo (336 ± 69.0 Kg peso corporal) foram aleatoriamente distribuídos para um dos três tratamentos dietéticos (controle: 25% palha, 75% concentrado; tratamentos: 25% palha, 60% concentrado, e 15% ambos SMSP e ISMSP) em um quadrado Latino de 3×3. Resultados: A composição química da dieta ISMSP não diferiu do controle ou das dietas SMSP. Na dieta ISMSP, a taxa de diminuição do pH do fluido ruminal e o aumento no período de armazenamento foram melhores do que com a dieta SMSP. O desaparecimento ruminal de matéria seca, proteína bruta, fibra em detergente neutro, e fibra detergente ácido foi ligeiramente superior em novilhos alimentados com ISMSP, do que aqueles alimentados com SMSP. Além disso, a taxa de degradação e degradabilidade da proteína bruta foi maior na dieta ISMSP, do que na dieta SMSP. As características efetivas de fermentação ruminal e a digestibilidade total de nutrientes não foram afetadas pela dieta SMSP, nem pela dieta ISMSP. Conclusão: Dietas com SMSP e ISMSP podem ser utilizados em substituição ao concentrado formulado sem causar efeitos adversos e ser um alimento rentável em novilhos Hanwoo. Além disso, a inoculação com LAB melhorou a qualidade conservante da SMSP.

Evaluation of enemas containing sucralfate in tissue content of muc-2 protein in experimental model of diversion colitis / Avaliação de enemas com sucralfato no conteúdo tecidual da proteina muc-2 em colite de exclusão experimental

ABSTRACT Background: The effects of topical application of sucralfate (SCF) on the tissue content of MUC-2 protein have not yet been evaluated in experimental models of diversion colitis. Aim: To measure the tissue content of MUC-2 protein in the colonic mucosa diverted from fecal stream submitted to the SCF intervention. Methods: Thirty-six rats underwent derivation of intestinal transit through proximal colostomy and distal mucous fistula. The animals were divided into three groups which were submitted application of enemas with saline, SCF 1 g/kg/day and SCF 2 g/kg/day. Each group was divided into two subgroups, according to euthanasia was done after two or four weeks. The colitis diagnosis was established by histopathological study and the inflammatory intensity was evaluated by previously validated scale. The MUC-2 protein was identified by immunohistochemistry and the tissue content was measured computerized morphometry). Results: The application of enemas with SCF in the concentration of 2 g/kg/day reduced inflammatory score of the segments that were diverted from fecal stream. The content of MUC-2 in diverted colon of the animals submitted to the intervention with SCF, independently of intervention period and the used concentration, was significantly greater than animals submitted to the application of enemas containing saline (p< 0.01). The content of MUC-2 after the intervention with SCF in the concentration of 2 g/kg/day was significantly higher when compared to the animals submitted to the application containing SCF at concentration of 1.0 g/kg/day (p<0.01). The tissue content of MUC-2 reached the highest values after intervention with SCF in the concentration of 2 g/kg/day for four weeks (p<0.01). Conclusion: The preventive application of enemas containing SCF reduces the inflammatory score and avoids the reduction of tissue content of MUC-2, suggesting that the substance is a valid therapeutic strategy to preserve the mucus layer that covers the intestinal epithelium.

RESUMO Racional: Os efeitos da aplicação tópica de sucralfato (SCF) no conteúdo tecidual da proteína mucina-2 (MUC-2) ainda não foram avaliados em modelos experimentais de colite de exclusão. Objetivo: Mensurar o conteúdo tecidual da proteína MUC-2 na mucosa cólica sem trânsito intestinal submetida à intervenção com SCF. Método : Trinta e seis ratos foram submetidos à derivação intestinal por colostomia proximal terminal e fístula mucosa distal. Foram divididos em três grupos segundo recebessem clisteres contendo solução fisiológica (SF), SCF 1 g/kg/dia e SCF 2 g/kg/dia. Cada grupo foi dividido em dois subgrupos, segundo a eutanásia ser realizada após duas ou quatro semanas. O diagnóstico de colite foi estabelecido por estudo histopatológico e a intensidade inflamatória foi avaliada por escala validada. A expressão tecidual da MUC-2 foi identificada por imunoistoquímica e seu conteúdo mensurado por morfometria computadorizada. Resultados: A aplicação de clisteres com SCF na concentração de 2 g/kg/dia reduziu a intensidade inflamatória no cólon sem trânsito fecal. O conteúdo tecidual de MUC-2 no cólon sem trânsito dos animais submetidos à intervenção com SCF, independente do tempo de intervenção e da concentração utilizada, foi maior quando comparado aos animais tratados com SF (p<0,01). O conteúdo de MUC-2 após a intervenção com SCF na concentração de 2 g/kg/dia foi maior quando comparado aos animais submetidos à intervenção com concentração menor (p<0,01). O conteúdo de MUC-2 foi maior após intervenção com SCF na concentração de 2 g/kg/dia por quatro semanas (p<0,01). Conclusão: A aplicação preventiva de clisteres com SCF reduz o grau de inflamação e preserva o conteúdo tecidual de MUC-2, em segmentos desprovidos de trânsito intestinal, mostrando-se uma estratégia terapêutica válida para preservar a camada de muco que recobre o epitélio intestinal.

Biogenic amines and mycotoxins concentrations in baled silage from organic and conventional farms / Concentrações de aminas biogênicas e micotoxinas em silagem embalada de fazendas orgânicas e convencionais

The aim of the current study was to investigate biogenic amines and mycotoxins concentrations in baled silage (mainly Poaceae family grasses) prepared in organic and conventional farms and to relate these parameters to fermentative parameters. The mean dry matter (DM) content was 364.10±93.31 and 424.70±95.93g/kg in the silage from organic and conventional farms respectively. The silage samples from organic farms had 17.00% higher (P≤ 0.05) tyramine (TY) than the silage from conventional farms. Conventional farm samples were characterized by 46.00% higher histamine (HIS) (P≤ 0.05), 9.80% higher putrescine (PUT) (P≤ 0.05), 17.30% higher cadaverine (CAD) (P≤ 0.05). Aflatoxins (AFL) (total) and zearalenone (ZEN), T-2/HT-2 concentrations were higher respectively 16.00% (P≤ 0.05) and 13.40% (P≤ 0.05), 1.80% (P≤ 0.05) in the silage prepared in organic farms. Deoxynivalenol (DON) concentration was higher 42.40% (P≤ 0.05) in silage from conventional farms. Volatile fatty acids (VFA), lactic acid, ethanol, pH and ammonia nitrogen showed that the silage samples from organic and conventional farms were of good quality. Our study suggests differences in biogenic amine formation or mycotoxins content in silage from organic and conventional farming, but, overall, the measured values are too low to be relevant for animal health. Furthermore, these differences might as well be due to the difference in dry matter content and plant maturity between the organic and conventional silage samples.(AU)

O objetivo do presente estudo foi investigar concentrações de aminas biogênicas micotoxinas em silagem embalada (principalmente gramíneas da família Poaceae) preparada em fazendas orgânicas e convencionais e relacionar esses parâmetros a parâmetros fermentativos. A massa seca média (MS) foi 364,10±93,31 e 424,70±95,93g/kg na silagem de fazendas orgânicas e convencionais, respectivamente. As amostras de silagem de fazendas orgânicas tinham 17% a mais de tyramina (TY) (p≤ 0,05) que as de fazendas convencionais. As amostras de fazendas convencionais foram caracterizadas por histamina (HIS) 46,00% mais alta (P≤ 0,05), 9,80% putrecina (PUT) mais alta (P≤ 0,05), 17,30% de cadaverina (CAD) mais alta (P≤ 0,05). Aflatoxnas (AFL) (total) e zearalenone (ZEN), T-2/HT-2 tinham concentrações mais altas em respectivamente 16,00% (P≤ 0,05) e 13,40% (P≤ 0,05), 1,80% (P≤ 0,05) na silagem preparada em fazendas orgânicas. Deoxinivalenol (DON) tinha concentração mais alta 42,40% (P≤ 0,05) na silagem de fazendas convencionais. Ácidos graxos voláteis (AGV), ácido lático, etanol, pH e nitrogênio de amônia mostraram que as amostras de silagem de fazendas orgânicas e convencionais tinham boa qualidade. Nosso estudo sugere diferenças na formação biogênica de amônia ou micotoxinas em silagem de fazendas orgânicas ou convencionais mas, em geral, os valores medidos foram muito baixos para serem relevantes à saúde animal. Ademais, essas diferenças podem ser devido à diferença na matéria sólida e maturidade da planta entre as amostras de silagem orgânica e convencional.(AU)

Validacao de metodo de cromatografia liquida para a determinacao de sete acidos graxos volateis intermediarios da digestao anaerobia / Validation of a liquid chromatography methodology for the analysis of seven volatile fatty acids intermediates of anaerobic digestion

Ácidos graxos voláteis (AGV) são importantes compostos intermediários indicadores da digestão anaeróbia. Este artigo apresenta dados de validação de uma metodologia para análise de uma mistura de sete AGV (C1 a C5) em amostras ambientais por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Foi utilizada uma coluna de exclusão iônica a 55ºC, volume de injeção de 10 µL e fase móvel (0,01 mol.L-1 H2SO4) a 0,6 mL.min-1. Os critérios de validação foram: limites de detecção e de quantificação, que ficaram na faixa de 5,0 a 10 mg.L-1 e 15 a 30 mg.L-1, respectivamente; linearidade (comprovada para todos os ácidos); repetitividade e sensibilidade (muito boa para a maioria dos ácidos); efeito de matriz (efeito de supressão observado para o ácido isobutírico) e exatidão (85 a 104%). Sendo assim, as condições operacionais adotadas se mostraram válidas para a quantificação de AGV em efluentes de reatores anaeróbios.

Volatile fatty acids (VFA) are important intermediate compounds that somehow indicate the efficiency of anaerobic systems. This paper presents results of method validation for seven VFA (C1 to C5) analysis in environmental samples by high performance liquid chromatography (HPLC). It was used an ion exclusion column kept at 55ºC; injection volume of 10 μL and mobile phase (0.01 mol.L-1 H2SO4) at 0.6 mL.min-1. The validation criteria adopted were: limits of detection and quantification, that fell in the ranges of 5.0 -10 mg.L-1 and 15-30 mg.L-1, respectively; linearity (verified for all acids); repeatability and sensibility (very good for most acids); matrix effect (suppression effect observed for isobutyric acid) and accuracy (from 85 to 104%). Therefore, the operational conditions adopted seemed to be adequate and valid to measure VFA in samples from anaerobic reactors.

Efeito da suplementação de cobre e selênio na dieta de novilhos Brangus sobre o desempenho e fermentação ruminal / The effects of copper and selenium supplementation in the diet of Brangus steers on performance and rumen fermentation

Vinte e oito bovinos Brangus foram usados para determinar o efeito da suplementação de cobre e selênio no desempenho e na fermentação ruminal. Os animais foram divididos em: 1) C(Controle) - sem a suplementação de cobre e selênio; 2) Se - 2mg Se/kg de matéria seca na forma de selenito de sódio; 3) Cu - 40mg Cu/kg de matéria seca na forma de sulfato de cobre; 4) Se/Cu - 2mg Se/kg de matéria seca na forma de selenito de sódio e 40mg Cu/kg de matéria seca na forma de sulfato de cobre. As pesagens dos animais foram feitas em intervalos de 28 dias, após jejum completo de 18 horas. Foram colhidas amostras de líquido ruminal para análises de ácidos graxos voláteis e pH. O ganho de peso diário aumentou com a suplementação de Se (P<0,05). A ingestão de matéria seca não foi alterada pelos tratamentos (P>0,05). Os animais submetidos à suplementação com Cu apresentaram menor pH ruminal quando comparado com a suplementação Se/Cu (P<0,05). Os animais suplementados com Se/Cu apresentaram maior proporção de ácido acético quando comparado com o controle (P<0,05). Para o ácido propiônico e butírico, não houve diferenças significativas (P>0,05) entre os tratamentos. Apesar do pouco efeito na fermentação ruminal, as suplementações de selênio, cobre e selênio/cobre proporcionaram uma melhor eficiência alimentar.

Twenty-eight Brangus cattle were used to determine the effect of copper and selenium supplementation on performance and rumen fermentation. The animals were divided in: 1) (Control) - without supplementation of copper and selenium; 2) Se - 2mg Se/kg of dry matter as sodium selenite; 3) Cu - 40mg Cu/kg of dry matter as copper sulphate; 4) Se/Cu - 2mg Se/kg of dry matter as sodium selenite and 40mg Cu/kg of dry matter as copper sulphate. Animal weighing was performed in 28 day intervals, after 18 hours of fasting. Samples of rumen liquid were collected for analysis of volatile fatty acid and pH. The daily weight gain increased with selenium supplementation (P<0.05). The dry matter intake was not altered by treatments (P>0.05). The animals that received copper supplementation had lower pH rumen compared with selenium/copper supplementation (P<0.05). The animals supplemented with selenium/copper had a high proportion of acetic acid when compared to control (P<0.05). For propionic and butyric acid, there was no difference (P>0.05) among treatments. Despite the little effect on rumen fermentation, the supplementations of selenium, copper and selenium/copper provided better feed efficiency.

Oxidative stress and changes in the content and pattern of tissue expression of ß-catenin protein in diversion colitis

OBJECTIVE: The aim of this study is to verify if oxidative stress is related to changes in content and pattern of β-catenin protein expression in an experimental model of diversion colitis. METHODS: Sixty Wistar rats were submitted to intestinal bypass. The animals were divided into three groups according to the sacrifice to take place in six, 12 and 18 weeks. For each group, five animals only underwent laparotomy (control). The presence of colitis was diagnosed by histological study, and its severity, by inflammation grading scale. Cellular oxidative stress was measured by comet assay. Tissue expression of β-catenin protein was analyzed by the immunohistochemistry and quantification of its tissue content by computerized morphometry. Statistical analysis was performed with the Student's t-test, median, Mann-Whitney, ANOVA and Kruskal-Wallis, adopting a significance level of 5% (p <0.05). RESULTS: Colon segments without fecal stream developed colitis, which worsened with time of exclusion. Segments without fecal stream suffer higher levels of oxidative stress when compared to those with stream, and it worsens with time of exclusion. The levels of cellular oxidative stress are directly related to the degree of inflammation. The total content of ß-catenin in segments without fecal stream reduces after six weeks, and does not vary thereafter. The content of β-catenin in the apical portion of the colon crypts decreases with time, whereas in the basal region, it increases. The total content of ß-catenin is inversely related to the degree of inflammation and levels of tissue oxidative stress levels. CONCLUSION: There are changes in tissue content of E-cadherin and increased expression of ß-catenin in proliferative regions of colonic crypts, related with oxidative tissue stress. (AU)

OBJETIVO: O objetivo do presente estudo é avaliar a relação entre estresse oxidativo e conteúdo tecidual de β-catenina em modelo experimental de colite de exclusão. MÉTODOS: Sessenta ratos Wistar foram submetidos à derivação intestinal e divididos em três grupos experimentais segundo o sacrifício ser realizado em 6, 12 e 18 semanas. Para cada grupo, cinco animais foram submetidos apenas a laparotomia (controle). A colite foi diagnosticada por estudo histológico, enquanto sua intensidade por escala de graduação inflamatória. Os níveis de estresse oxidativo foram mensurados pelo ensaio cometa, enquanto a expressão e o conteúdo tecidual de ß-catenina por imunoistoquímica e morfometria computadorizada, respectivamente. Os resultados foram analisados pelos testes t de Student, Mann Whitney, ANOVA e Kruskal-Wallis, estabelecendo-se nível de significância de 5% (p<0,05). RESULTADOS: Nos segmentos sem trânsito fecal ocorre desenvolvimento de colite que piora com o tempo de exclusão. Segmentos sem trânsito sofrem maiores níveis de estresse oxidativo quando comparados àqueles com trânsito, piorando com o tempo de exclusão. Os níveis de estresse oxidativo encontram-se diretamente relacionados a piora da inflamação. O conteúdo total de ß-catenina no cólon sem trânsito reduz após seis semanas de exclusão. O conteúdo de ß-catenina no ápice das criptas cólicas diminui com o tempo, enquanto na região basal, aumenta. O conteúdo total da β-catenina encontra-se inversamente relacionado ao grau de inflamação e aos níveis de estresse oxidativo. CONCLUSÃO: Existe redução no conteúdo de ß-catenina, principalmente no ápice das glândulas cólicas e aumento nas regiões basais, relacionadas à piora do estresse oxidativo. (AU)

Evaluation of topical n-acetylcysteine in diversion colitis

INTRODUCTION: Diversion colitis (DC) is a benign condition characterized by the appearance of inflammation in the mucosa of the colon or rectum devoid of fecal stream. Oxidative stress has been associated with the etiopathogenesis of the disease. N-acetylcysteine (NAC) is a substance with antioxidant properties, used in different treatments of inflammatory diseases. The purpose of this study was to evaluate the effects of topical applications of NAC in an experimental model of DC. METHODS: Thirty-six Wistar rats were submitted to deviation of fecal stream by proximal colostomy and a distal mucosal fistula. They were distributed into 3 experimental groups of 12 animals according to the daily application of enemas containing 0.9% saline or 2 doses of NAC, 25 mg/kg and 100 mg/kg, respectively. In each group, half of the animals were sacrificed after two weeks of irrigation and half after four weeks of irrigation. The diagnosis of colitis was assessed by histopathological analysis and the grade of inflammation by inflammatory grading scale. The results were evaluated with the Mann-Whitney test, adopting significance level of 5% (p<0.05). RESULTS: Daily enema of NAC improved the inflammatory alterations in colon without fecal stream. In colonic segments without fecal stream, the inflammatory score was significantly lower in the animals treated with 100mg/kg, compared with those treated with saline solution or 25 mg/kg of NAC, regardless of the duration of intervention (p<0.05). The inflammatory score in colon segments without fecal stream was significantly lower in the animals treated with both concentration of NAC, compared with those treated with saline, regardless of the concentration and duration of irrigation (p<0.01). CONCLUSIONS: Enemas containing NAC improve the inflammatory process and constitute a beneficial tool in the treatment of DC. (AU)

INTRODUÇÃO: Colite de exclusão (CE) é uma condição benigna caracterizada pelo desenvolvimento de inflamação na mucosa do cólon desprovida de trânsito fecal. O estresse oxidativo tem sido implicado na patogênese da doença. A n-acetilcisteína (NAC) é uma substância com efeitos antioxidantes, sendo utilizada no tratamento de várias doenças inflamatórias. OBJETIVO: Avaliar os efeitos da aplicação tópica de NAC em modelo de CE. MÉTODO: Trinta e seis ratos Wistar foram submetidos ao desvio do trânsito por meio de colostomia proximal e fístula mucosa distal. Os animais foram distribuídos em três grupos experimentais de igual tamanho segundo a aplicação de enemas diários contendo soro fisiológico 0,9% ou NAC nas concentrações de 25 mg/kg ou 100 mg/kg. Em cada grupo, metade dos animais foi sacrificada após duas ou quatro semanas de irrigação. O diagnóstico de CE foi feito por estudo histopatológico e a graduação por escala inflamatória. Na avaliação dos resultados, utilizou-se o teste de Mann-Withney, adotando-se nível de significância de 5% (p<0,05). RESULTADOS: A aplicação intrarretal de NAC melhorou a inflamação no cólon sem trânsito intestinal. Nos segmentos sem trânsito, o escore inflamatório foi menor nos animais tratados com NAC na concentração de 100 mg/kg, quando comparado aos tratados com 25 mg/kg (p<0,05). O escore inflamatório nos segmentos sem trânsito fecal foi menor nos grupos tratados com NAC, quando comparados ao tratado com soro fisiológico, independente da concentração e do tempo de intervenção (p<0,01). CONCLUSÃO: A aplicação de enemas contendo NAC melhora o processo inflamatório demonstrando-se estratégia benéfica para o tratamento da CE. (AU)

Avaliação do número de células caliciformes nas criptas da mucosa colônica com e sem trânsito intestinal / Evaluation of the number of goblet cells in crypts of the colonic mucosa with and without fecal transit

OBJETIVO: Medir a espessura das criptas e quantificar o número de células caliciformes comparando a mucosa cólica com e sem trânsito intestinal, relacionando-as ao tempo de exclusão. MÉTODOS: Sessenta ratos Wistar, foram distribuídos em três grupos com 20 animais segundo a operação final para a retirada dos cólons, realizadas em seis, 12 ou 18 semanas. Em cada grupo, 15 animais foram submetidos à derivação do trânsito por colostomia proximal no cólon esquerdo e fístula mucosa distal e cinco apenas à laparotomia (controle). Os cólons com e sem trânsito fecal foram removidos, processados, submetidos a cortes histológicos corados pela hematoxilina-eosina. A altura das criptas colônicas e o número de células caliciformes foram mensurados por morfometria computadorizada. Foram utilizados os testes t de Student e Kruskal-Wallis para comparação e análise de variância, estabelecendo-se nível de significância de 5% (p<0,05). RESULTADOS: A altura das criptas diminui nos segmentos sem trânsito fecal (p=0,0001), reduzindo entre seis e 12 semanas de exclusão (p=0,0003), estabilizando-se após este período. O número de células caliciformes nas criptas é menor nos segmentos sem trânsito após 12 e 18 semanas (p=0,0001), porém aumenta com o decorrer do tempo de exclusão (p=0,04) CONCLUSÃO: A exclusão do trânsito intestinal diminui a espessura das criptas colônicas e o número de células caliciformes nos segmentos sem trânsito. Existe aumento do número de células caliciformes com o decorrer do tempo de exclusão.

OBJECTIVE: To measure the thickness of the crypts and quantify the number of goblet cells of the colonic mucosa with and without intestinal transit, relating them to exclusion time. METHODS: Sixty Wistar rats were divided into three groups of 20 animals each according to the time of the final operation for the removal of the colon, in six, 12 or 18 weeks. In each group 15 animals underwent colonic exclusion by left colon proximal colostomy and distal mucous fistula, and five underwent only laparotomy (control). The colons with and without fecal stream were removed, processed and submitted to histological sections stained with hematoxylin-eosin. The height of the colonic crypts and the number of goblet cells were measured by computerized morphometry. We used the Student t test and Kruskal-Wallis test for comparison and analysis of variance, using a significance level of 5% (p <0.05). RESULTS: The height of the crypts decreased in segments without fecal stream (p =0.0001), reducing from six to 12 weeks of exclusion (p = 0.0003), stabilizing thereafter. The number of goblet cells in the crypts was smaller in segments without transit after 12 and 18 weeks (p = 0.0001), but increased as the time of exclusion progressed (p = 0.04) CONCLUSION: The exclusion of intestinal transit decreases the thickness of the colonic crypts and the number of goblet cells in the segments without transit. There is an increased number of goblet cells in the course of time exclusion.

The importance of oxygen free radicals in the etiopathogenesis of diversion colitis in rats / A importância dos radicais livres de oxigênio na etiopatogenia da colite de exclusão em ratos

PURPOSE: Quantify the levels of oxidative DNA damage of epithelial colon cells comparing segments with and without fecal stream. METHODS: Sixty Wistar rats were subjected to deviation of fecal stream by proximal colostomy and a distal mucosal fistula. Animals were divided into three experimental groups that were sacrificed 6, 12 and 24 weeks after surgery. In each experimental group, five animals underwent laparotomy without intestinal deviation (sham subgroup). The diagnosis of colitis was made by histopathological analysis and the inflammatory activity index by graduated scale. The neutrophil infiltration was determined by myeloperoxidase tissue levels and the intensity of oxidative DNA damage by comet assay. The Mann-Withney and Student t test were used to compare the results among experimental subgroups and the Kruskal-Wallis test for variance analysis, adopting a significance level of 5 percent (p<0.05). RESULTS: Colon segments without fecal stream was shown higher histological inflammatory score of the colon wall after 12 and 24 weeks (p=0.001) that increased with the time of diversion (p=0.01). The activity of myeloperoxidase in segments without fecal stream decreased with the time (p=0.001). Oxidative DNA damage levels were significantly higher in the segments without fecal stream, (p=0.0001), independent of time of colon diversion, and increase with the time (p=0.0007). CONCLUSIONS: Colon segments without fecal stream showed high levels of oxidative DNA damage related to histological alterations observed in diversion colitis. The levels of oxidative DNA damage in segments devoid of the fecal stream increase with the time of intestinal exclusion.

OBJETIVO: Quantificar os níveis de dano oxidativo ao DNA em células epiteliais da mucosa cólica comparando segmentos com e sem trânsito fecal. MÉTODOS: Sessenta ratos Wistar foram submetidos à derivação do trânsito intestinal por colostomia proximal e fístula mucosa distal. Os animais foram divididos em três grupos experimentais segundo terem sido sacrificados 6, 12 e 24 semanas após a cirurgia. Em cada grupo experimental, cinco animais foram submetidos à laparotomia isolada sem derivação fecal (grupo sham). O diagnóstico de colite foi estabelecido por análise histopatológica e o índice de atividade inflamatória por escala graduada. A infiltração neutrofílica foi determinada pelos níveis teciduais da mieloperoxidase e a intensidade do dano oxidativo ao DNA pelo ensaio em cometa. Utilizaram-se os testes de Mann-Withney e o teste t de Student para comparar os resultados encontrados entre os subgrupos experimentais e o teste de Kruskal-Wallis para análise de variância, adotando-se nível de significância de 5 por cento (p<0,05). RESULTADOS: Os segmentos cólicos, sem trânsito fecal apresentaram maior escore histológico de inflamação após 12 e 24 semanas (p=0,001), que aumentou com o tempo de derivação (p=0,01). A atividade da mieloperoxidase nos segmentos sem trânsito fecal diminuiu com o progredir do tempo (p=0,001). Os níveis de dano oxidativo ao DNA foram significativamente maiores nos segmentos sem trânsito fecal (p=0,0001), independente do tempo de exclusão considerado, aumentando com o progredir do tempo de exclusão (p = 0,0007). CONCLUSÕES: Segmentos cólicos desprovidos de trânsito fecal apresentam níveis elevados de dano oxidativo ao DNA relacionados às alterações histológicas observadas na colite de exclusão. Os níveis de dano oxidativo ao DNA nos segmentos desprovidos de trânsito fecal aumentam com o decorrer do tempo de exclusão.

Avaliação dos níveis de peroxidação lipídica em células da mucosa cólica após aplicação de enemas com peróxido de hidrogênio: estudo experimental em ratos / Evaluation of lipid peroxidation levels on mucosa colonic cells afther application of hydrogen peroxide in enemas: experimental study in rats

A aplicação de clisteres contendo peróxido de hidrogênio (H2O2) determina o aparecimento de quadros graves de colite, algumas vezes de evolução fatal. É possível que a colite induzida por H2O2 possa ocorrer pela quebra da barreira funcional do epitélio cólico por estresse oxidativo. Objetivo: Avaliar os níveis de peroxidação lipídica em células da mucosa cólica após instilação de H2O2 no reto excluso de trânsito fecal. Método: Vinte seis ratos Wistar machos foram submetidos a colostomia proximal terminal no cólon descendente e fístula mucosa distal. Os animais foram randomizados em dois grupos segundo o sacrifício ter sido realizado duas ou quatro semanas após a derivação intestinal. Cada grupo experimental foi dividido e dois subgrupos segundo aplicação de clisteres, em dias alternados, contendo solução fisiológica a 0,9 por cento ou H2O2 a 3 por cento. O diagnóstico de colite foi estabelecido por estudo histopatológico e os níveis de dano oxidativo tecidual pela dosagem de malondialdeído por espectrofotometria. Os resultados foram analisados com os testes de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis, estabelecendo-se nível de significância de 5 por cento (p menor que0,05)

Resultados: Os níveis de malondialdeído nos irrigados com SF nos cólons com e sem trânsito fecal após duas e quatro semanas de irrigação foram de: 0,05 mais ou menos 0,006; 0,06 mais ou menos 0,006 e 0,05 mais ou menos 0,03, 0,08 mais ou menos 0,02, respectivamente. Os níveis de malondialdeído nos irrigados com H2O2, nos cólons com e sem trânsito, após duas e quatro semanas de irrigação foram de 0,070 mais ou menos 0,006; 0,077 mais ou menos 0,01 e 0,052 mais ou menos 0,01, 0,08 mais ou menos 0,04, respectivamente. Após duas semanas os níveis de malondialdeído foram maiores nos animais irrigados com H2O2 em relação ao grupo controle (p= 0,007 e p= 0,01, respectivamente). Após quatro semanas não houve diferenças significantes Não ocorreu variação nos níveis de malondialdeído com o decorrer tempo de irrigação. Conclusão: Clisteres com H2O2, podem determinar o aparecimento de colite por ocasionarem estresse oxidativo nas células epiteliais da mucosa intestinal.

The use of rectal enemas with hydrogen peroxide (H2O2) determines the onset of severe colitis, sometimes with fatal evolution. It is possible that H2O2-induced colitis can occur by damage to the functional epithelial barrier of the colon by oxidative stress. Objective: The aim of present study was evaluate the levels of lipid peroxidation in cells of the colonic mucosa after instillation of H2O2 into the rectum excluded from fecal transit. Method: Twenty six male Wistar rats were undergone to proximal terminal colostomy in the descending colon and distal mucous fistula. The animals were randomized in two experimental groups according to the sacrifice was made two or four weeks after diversion of the fecal stream. Each experimental group was divided into two subgroups second application of enemas containing saline solution 0.9 percent or 3 percent H2O2 on alternate days. The diagnosis of colitis was established by histopathology study and the oxidative damage by tissue levels of malondialdehyde quantified by spectrophotometry. The results were analyzed with the Mann-Whitney and Kruskal-Wallis test, adopting a significance level of 5 percent (p less than 0.05).

Results: The levels of malondialdehyde in colon segments irrigated with saline, with and without fecal stream after two and four weeks of irrigation were: 0.05 more or less 0.006, 0.06 more or less 0.006 and 0.05 more or less 0.03, 0.08 more or less 0.02, respectively. The levels of malondialdehyde in colon segments irrigated with H2O2, in the colon with and without fecal stream, after two and four weeks of irrigation were 0.070 more or less 0.006, 0.077 and 0.052 more or less 0.01 more or less 0.01, 0.08 more or less 0.04, respectively . After two weeks the levels of malondialdehyde were higher on animals irrigated with H2O2 than control group (p = 0.007 and p = 0.01, respectively). After four weeks there were no significant differences in malondialdehyde levels related with the time of irrigation. Conclusion: Rectal enemas with H2O2, may determine the onset of colitis by oxidative stress on epithelial cells of intestinal mucosa.

Uso de extrato de levedura como fonte de carbono e de mediadores redox, para a degradação anaeróbia de corante azo / Use of yeast extract as source of carbon and redox mediators for the anaerobic degradation of azo dyes

O trabalho investigou a influência do uso do extrato de levedura, fonte dos mediadores redox riboflavina e nicotinamida, na remoção de cor de solução de corante azo Drimaren Azul HF-RL em condições anaeróbias. O trabalho envolveu a execução de ensaios em batelada, em frascos-reatores mantidos a 25 ºC, incubados com o azo-corante e lodo anaeróbio na presença e ausência de fontes de carbono (extrato de levedura ou glicose) e de mediadores redox (riboflavina ou extrato de levedura). O monitoramento da variação temporal de cor, a demanda química de oxigênio (DQO) e ácidos graxos voláteis (AGV) mostraram que a adição de extrato de levedura (0,5 g/L) resultou em eficiências de remoção de cor de 80 a 85 por cento nas primeiras 24 horas de incubação, e que os produtos da degradação do azo-corante foram tóxicos para todo o consórcio anaeróbio, o que resultou em baixas eficiências de remoção de DQO na presença e ausência do extrato de levedura. Os resultados indicaram, ainda, que as eficiências de remoção de cor foram inferiores a 30 por cento na presença de apenas glicose (fonte de carbono) ou riboflavina (mediador redox), indicando que o extrato de levedura atuou simultaneamente como fonte de carbono e de mediadores redox.

This paper investigated the influence of using yeast extract, which is the source of redox mediators riboflavin and nicotinamide, in the decolorization of solutions containing the azo dye Drimaren Blue HF-RL in anaerobic conditions. It involved the incubation of serum bottles kept at 25 ºC and inoculated with the azo-dye, and anaerobic sludge in the presence and absence of carbon source (glucose or yeast extract) and redox mediators (riboflavin and yeast extract). The monitoring of color, chemical oxygen demand (COD) and volatile fatty acids (VFA) showed that the addition of yeast extract (0.5 g/L) resulted in 80 to 85 percent color removal in the first 24 hours of incubation; and that the metabolites of dye degradation were toxic to the anaerobic microorganisms, which led to low COD removal efficiencies either in the presence or absence of yeast extract. The results also showed that the efficiencies of color removal were below 30 percent in the presence of only glucose or riboflavin, indicating that the yeast extract acted simultaneously as source of carbon and redox mediators.

Alterações morfológicas induzidas por butirato, propionato e lactato sobre a mucosa ruminal e a epiderme de bezerros: I Aspectos histológicos / Lactate, propionate and, butyrate induced morphological alterations on calf ruminal mucosa and epidermis: I Histologycals aspects

Dezessete bezerros foram utilizados para avaliar o efeito de ácidos graxos voláteis (AGV) sobre a morfologia ruminal, a epiderme do plano nasolabial, a epicera e o perioplum, e para validar a execução de biópsias tegumentares como indicadores de alterações da mucosa ruminal. Os animais receberam infusões intra-ruminal de butirato, propionato, lactato ou salina (controle) durante 37 dias. A insulina sorológica foi dosada no 22º dia experimental nos tempos de 0, 90, 180 e 360 minutos em relação à infusão diária da manhã. No 89º dia de vida, após o abate, foram coletados fragmentos ruminais e epidérmicos. Todos os AGV induziram aumento proporcionalmente maior no peso do ruminorretículo que no peso do omaso, sendo o butirato aparentemente mais estimulador da massa do estômago aglandular. Embora o butirato tenha sido mais estimulador da secreção de insulina, os AGV foram incapazes de induzir ganho nas dimensões papilares. Os AGV aumentaram a proliferação celular nos epitélios do rúmen e do perioplum traseiro, contrariamente ao efeito sobre o plano nasolabial e a epicera. Os efeitos dos AGV sobre a morfologia da mucosa ruminal e de outros tecidos queratinizados sugerem que danos morfológicos no rúmen e cascos podem ter causa comum. Biópsias tegumentares podem ter utilidade como indicadores de alterações morfológicas da mucosa ruminal.

The effect of butyrate, propionate, and lactate on ruminal wall, epidermis of nasolabial surface, perioplum, and epicera of 17 neonatal calves was evaluated. The experiment also aimed to validate the procedure and interpretation of tegument biopsies as indicators of ruminal mucosa alterations. Serum insulin was sampled on the 22nd day from the beginning of treatments, at 0, 90, 180, and 360 minutes after the morning infusion. After slaughtering, samples were collected from ruminal wall, nasolabial surface, epicera, and perioplum from face and hindquarters. All volatile fatty acids (VFA) induced greater increase in ruminal-reticulum proportionate weight than in omasum. Butyrate was a greater stimulator of non-glandular stomach growth. Although butyrate stimulated more insulin secretion, this VFA was not capable to induced gain on papillae area or height. The effect of nasolabial surface VFA infusion was the opposite to that observed in the rumen. VFA increased hind perioplum mitotic index, contrary to its effect on the nasolabial surface and epicera. VFA effects on ruminal mucosa morphology and on other keratinized tissues suggest that morphological damage on hoof and ruminal epithelium may have a common cause. Tegumentary biopsies may be useful as indicators of morphological alterations of ruminal mucosa.

Alterações morfológicas induzidas por butirato, propionato e lactato sobre a mucosa ruminal e epiderme de bezerros: II. Aspectos ultra-estruturais / Lactate, propionate, and butyrate induced morphological alterations on calf ruminal mucosa and epidermis: II. Ultra-structurals aspects

Avaliou-se o efeito de ácidos graxos voláteis (AGV) sobre a integridade do epitélio no rúmen, no plano nasolabial, na epicera e no perioplum traseiro e dianteiro de bezerros e validou-se a feitura de biópsias tegumentares como indicadores de alterações morfológicas da mucosa ruminal. Dezessete bezerros, com sonda no rúmen, receberam infusões intra-ruminais de AGV ou salina, durante 37 dias. Aos 89 dias de vida, após o abate, foram colhidas amostras dos tecidos. Os AGV aumentaram a área de epitélio total e a área de células metabolicamente ativas no epitélio ruminal, embora o butirato não tenha induzido ao desenvolvimento papilar. A área de epitélio não queratinizado no plano nasolabial foi reduzida pela infusão de AGV. Butirato e lactato foram mais indutores de alterações patológicas no epitélio ruminal. Não foram observadas lesões histológicas nos epitélios do plano nasolabial, da epicera e do perioplum, mostrando que essas são conseqüências do efeito direto dos AGV sobre o epitélio ruminal. Os efeitos indireto e direto dos AGV sobre a morfologia dos tecidos epiteliais queratinizados não foram iguais. Biópsias tegumentares podem ter utilidade como indicadores de alterações morfológicas da mucosa ruminal.

The effect of volatile fatty acids (VFA) on rumen wall, epidermis of nasolabial surface, perioplum, and epicera of calves was evaluated. The experiment also aimed to validate the procedure of tegument biopsies as indicators of ruminal mucosa alterations. Seventeen neonatal calves with foley catheters received intraruminal infusions of VFA or saline, during 37 days. At 89-day-old, the animals were slaughtered and tissue samples were collected from rumen, nasolabial surface, epicera, and perioplum from face and hindquarters. VFA infusion increased total epithelium area and metabolically active ruminal cell area; although butirate did not induce the papilar development. The effect of nasolabial surface VFA infusion was the opposite to that observed in the rumen. No histological lesion was observed on nasolabial surface, epicera, and perioplum, demonstrating that these are consequences of VFA direct effect on ruminal epithelium. Butyrate and lactate induced more alterations on the ruminal epithelium. Indirect and direct VFA effects on keratinized epithelium tissues morphology were not identical. Tegumentary biopsies may be useful as indicators of morphological alterations of ruminal mucosa.

Avaliação da acurácia de diversos métodos para determinação de ácidos graxos voláteis e alcalinidade a bicarbonato para monitoramento de reatores anaeróbios / Evaluation of the accuracy of several methods for determination of volatile fatty acids and bicarbonate alkalinity for the monitoring of anaerobic reactors

Sistemas de tratamento anaeróbios são sensíveis às mudanças de condições ambientais que influenciam no metabolismo dos microrganismos responsáveis pela estabilidade do processo. Os objetivos deste trabalho foram (i) avaliar a acurácia de métodos que determinam os parâmetros de controle ácidos graxos voláteis (AGV) e alcalinidade a bicarbonato (AB) em amostras preparadas com concentrações de 50 a 1000 mg/L e, (ii) verificar diferentes procedimentos de remoção de CO2 formado durante titulação ácida das amostras. A partir do teste estatístico de Tukey aplicado aos resultados obtidos, observou-se que os métodos Kapp e DiLallo & Albertson com utilização de ultra-som para a remoção de CO2 do meio líquido apresentaram os melhores resultados para AGV. Os métodos da Condutividade, Kapp e Jenkins se destacaram na determinação de AB.

Anaerobic treatment systems are sensitive to the environmental condition changes. Such changes may have influence on the metabolism of the microorganisms responsible for the process stability. The aims of this work were (i) to evaluate the accuracy of methods to determine control parameters volatile fatty acids (VFA) and bicarbonate alkalinity (BA) in samples prepared with concentrations from 50 to 1000 mg/L and, (ii) to verify different procedures of the CO2 removal formed during the acid titration of the samples. From the Tukey statistical test applied to the obtained results it was observed that the Kapp and DiLallo & Albertson methods using sonic equipment to remove CO2 from the liquid presented better results for VFA. The Conductivity, Kapp and Jenkins methods were considered the most reliable for BA determination.

Os ácidos graxos de cadeia curta na cicatrização de anastomoses colônicas: estudo experimental em ratos / The short chain fatty acids on colonic anastomosis healing: experimental study on rats

OBJETIVO: Avaliar a ação dos ácidos graxos de cadeia curta (AGCC) na cicatrização de anastomoses colônicas em ratos. MÉTODO: Utilizaram-se 50 ratos divididos em 4 grupos. Dois desses grupos, vinte e seis animais, foram submetidos à operação de Hartmann; metade destes (grupo HF) recebeu infusões retais diárias, no pós-operatório, de solução fisiológica a 0,9 por cento ; a outra metade (grupo HA) recebeu solução de butirato de sódio à 80mmol/l (AGCC) (HA). Os dois grupos restantes, vinte e quatro animais foram submetidos à anastomose colônica término-terminal a 4 cm da borda anal. Destes, 12 animais (grupo AF) receberam infusões retais de soro fisiológico a 0,9% e 12 animais (grupo AA) receberam a solução com AGCC. Os animais foram avaliados no 7º e 14º dia do pós-operatório. Foi realizada análise histológica da densitometria do colágeno pela coloração do sirius red, utilizando-se a microscopia de polarização com método computadorizado. RESULTADOS: Comparando-se os grupos submetidos à cirurgia de Hartmann, portanto na ausência do trânsito intestinal, observou-se concentração significativamente maior de colágeno I e total no grupo que recebeu AGCC (p=0,001). Comparando-se os grupos submetidos à anastomose término-terminal, com interferência do trânsito intestinal, não se encontrou diferença significante da concentração de colágeno I e total (p=0,056 e p=0,397, respectivamente). A ação isolada do trânsito intestinal promoveu também aumento da produção de colágeno, quando comparado ao grupo sem atuação do trânsito intestinal. CONCLUSÃO: A administração via retal de AGCC, na ausência do trânsito intestinal mostrou-se de grande valia, promovendo aumento da síntese do colágeno. Independentemente da interferência do trânsito intestinal, o principal efeito do AGCC esteve relacionado com o aumento da maturação do colágeno.

BACKGROUND: The aim of the present study was to evaluate the intraluminal effects of short chain fatty acids (SCFA) on the healing of defunctioned colon and in the presence of faecal loading in rats. METHODS: Fifty adult Wistar rats were divided in four groups. Two of them, twenty six rats, were submitted to Hartmann's procedure (HC - Hartmann Control - and HSCFA - Hartmann SCFA) and colonic anastomosis were performed in the other two groups (AC - Anastomosis Control - and ASCFA - Anastomosis SCFA). The control groups (HC and AC) received rectal infusions of saline, while the experimental groups (HSCFA and ASCFA) received the same kind of infusion but with an isosmolar solution of sodium butyrate at 80mmol/l (SCFA). The animals were sacrificed at the 7th and 14th postoperative day. Histologic preparations with sirius red staining were performed to analyse the collagen densitometry by optic microscopy with a polarized light. Collagen I, collagen III and total collagen were quantified by a computer software. RESULTS: In the groups submitted to Hartman's operation - with bowel rest - the animals submitted to rectal infusions of SCFA showed an increase in the quantity of total and collagen I. Evaluating the groups submitted to colonic anastomosis - with interference of intraluminal bulk - there was an increase in collagen I in the experimental group. The interference of the diet bowel content in the healing process, with or without SCFA rectal infusions, was analyzed crossing the groups of different surgical procedures. CONCLUSION: The main effect of rectal infusions of SCFA was related to the collagen I, either with or without interference of the intestinal bulk. The presence of diet bowel content also increased the collagen production.